مشخصات پژوهش

عنوان	بیان موقت پروتئین اسپایک ویروس برونشیت عفونی طیور در گیاه توتون
نوع پژوهش	پایان نامه
کلیدواژه‌ها	آگرواینفیلتراسیون، آنتیژن، بیان موقت ژن پ روتئین نوترکیب، ژن اسپایک
چکیده	بیماری ویروس برونشیت عفونی یکی از مهمترین بیماریهای طیور است. که به منظور کنترل آن در طول پرورش، چندین بار اقدام به واکسیناسیون میشود. جهت ساخت واکسن گیاهی برعلیه این بیماری، همسانهسازی ژن اسپایک که نقش اساسی در اتصال ویروس به سلول میزبان و در نهایت تکثیر و بیماریزایی آن دارد بهعنوان هدف پروژه در نظر گرفته شد. سیستم بیان موقت روشی برای تولید پروتئین هدف است که نیاز به بیان پایدار را برطرف نموده و روشی سریع، قابل انعطاف و تکرارپذیر جهت تولید میزان بالای این ژن است. در این مطالعه، بیان موقت ژن اسپایک در توتون Nicotiana tabacum مورد بررسی قرار گرفت. ابتدا به منظور تایید صحت توالی قطعه اسپایک تعیین توالی صورت گرفت. ناقل دوتایی بیانی pBI121 با دارا بودن ناحیه T-DNA ، حاوی ژن گزارشگر گاس و پیشبر CaMV35S دارای مشخصات لازم جهت استفاده برای انتقال ژن از طریق آگرواینفیلتریشن به گیاه بود و به همین دلیل بهعنوان ناقل هدف جهت همسانهسازی انتخاب شد. ناقل نوترکیب pBI121 ابتدا برای تکثیر داخل E.coli سویه DH5 همسانهسازی شد و بعد از تایید پلاسمید نوترکیب با استفاده از هضم آنزیمی و PCR متعاقبا در آگروباکتریوم تومهفاشینس سویه LBA4404 همسانهسازی و از طریق آگرواینفیلتراسیون به گیاه توتون انتقال داده شد. رونویسی S به روش RT-PCR در برگ گیاه توتون اثبات شد. تولید پروتئین نوترکیب بهوسیله آزمون الایزا تایید شد. برای بررسی میزان بیان موقت پروتئین نوترکیب از آزمون الایزا در قالب طرح کاملا تصادفی در سه تکرار استفاده شد. بر اساس نتایج حاصل از آزمون الایزا اختلاف معنی داری در سطح احتمال 1% بین میانگین میزان جذب پروتئین تیمارها و کتنرل منفی مشاهده شد.
پژوهشگران	بهمن بهرام نژاد (استاد راهنما)، امجد فرزین پور (استاد مشاور)، پریسا خالدیان (دانشجو)