مشخصات پژوهش

عنوان	انتقال و بیان ژن اکسندین4- متصل به زیر واحد B سم وبا )CTB )در گیاه کاهو
نوع پژوهش	مقاله چاپ‌شده در مجلات علمی
کلیدواژه‌ها	آگروباکتریوم تومفاشینس، اکسندین-4، انتقال ژن، بیان ژن، ناقلpBI121
چکیده	اکسندین-4 (EX4) یک پروتئین شبیه به شبه گلوکان ( GLP-1) است و دارای نیمه عمر بیشتر و تاثیر بیشتر در القا ترشح انسولین است. اتصال EX4 به زیر واحد غیر سمی وبا ( CTB) موجب اقزایش کارایی آن از طریق جذب در سیستم گوارشی می‌شود. در این تحقیق، ناقلpBI121 دارای قطعه CTB-EX4 توسط باکتری Agrobacterium tumefaciens به هسته گیاه کاهو وارد شد.نتایج نشان داد 25/20% از ریزنمونه‎‌های تلقیح شده با موفقیت تراریخت و باززا شدند. برای ایجاد گیاهان نسل دوم (T1) در مجموع تعداد 24 عدد بذر T0 کشت گردید که 42% از بذرهای کشت شده به صورت کامل رشد کردند و به بذر نشستند. با استفاده از آغازگرهای اختصاصی در واکنش PCR، تراریختی و حضور ژن CTB-EX4 در گیاهان T1 مورد بررسی شد. بیان نیمه کمی و کمی ژن CTB-EX4 در سطح mRNA با استفاده از آزمون های RT-PCR و Real time PCR و در سطح پروتئین با استفاده از آنتی‌بادی‌های اختصاصی و آزمون‌های ELISA و Western Blot مورد بررسی قرار گفت. در نهایت تعداد نسخه های انتقال یافته به گیاهان T1 با استفاده از دستگاه Real time PCR با استفاده از روش مطلق و منحنی استاندارد و همچنین روش نسبی، نسبت به ژن کنترل داخلی Actin برآورد شد. نتایج حاکی از تراریختی 60% لاین‌های نسل دوم (T1) و بیان ژن CTB-EX4 در سطح mRNA و پروتئین بود. نتایج نشان داد که مقدار بیان در لاین های مورد بررسی متفاوت بود. نتایج حاصل نشان داد که پروسه انتقال ژن CTB-EX4 به گیاه کاهو موفقیت‌آمیز بود وگیاه کاهو قادر به بیان ژن مورد نظر در سطوح RNA و پروتئین بود. با در نظر گرفتن پروسه‌های بعدی از جمله تخلیص و ارزیابی فعالیت بیولوژیکی پروتئین تولید شده، از گیاهان می‌توان به عنوان یک بیوراکتور مناسب جهت تولید پروتئین‌های نوترکیب بهره برد.
پژوهشگران	ابراهیم مرادی (نفر اول)، محمد ناجی (نفر دوم)، بهمن بهرام نژاد (نفر سوم)، هیمن صالحی (نفر چهارم)