مشخصات پژوهش

عنوان	انتقال ژن اکسندین-4 متصل به زیر واحدBسم وبا (CTB) توسط آگروباکتریوم به تنباکو (Nicotiana tabacum)
نوع پژوهش	پایان نامه
کلیدواژه‌ها	آگروباکتریوم تومفاشینس، بیان موقتژن،پروتئین های درمانی نوترکیب، ژنCTB-EX4،کشاورزی مولکولی
چکیده	شیوع بیماری دیابت نوع 2، به طور قابل توجهی در سراسر جهان رو به افزایش است. پپتید شبه گلوکاگون (GLP-1)، یک هورمون اینکرتینی است که ترشح انسولین را در مسیروابسته به گلوکز، افزایش می دهد. GLP-1نیمه عمر کوتاهی دارد ودر معرض تجزیه سریع آنزیمی قرار می گیرد و توسط آنزیم دی پپتیدیل پپتیداز IVبه فرم غیر فعال بیولوژیکی خود در میآید. اکسنتاید، یک اکسندین-4 مصنوعیاست که آنالوگ GLP-1می باشدو دارای نیمه عمر طولانی تر با اثرات انسولین درمانی قوی تری است،اما نیاز به نگهداری در دمای پایین و تزریق زیر جلدی روزانه دارد. در این مطالعه، اکسندین-4 جدا سازی شده از بزاق مارمولک، که آگونیست GLP-1می باشد، به عنوان یک پروتئین متصل شده به زیر واحد Bسم وبا، به طور موقت در گیاه تنباکو بیان شد. ابتدا توالی ژن اکسندین-4 متصل به زیر واحد Bسم وبا طراحی شد و جایگاههای برش آنزیمیBam HI وSacIبه ترتیب در ابتدا زیر واحد Bسم وباو در انتهای توالی ژن اکسندین-4 قرار داده شد و سپس سنتز گردید. ژن اکسندین-4 متصل به زیر واحد Bسم وباهمسانه سازی شده در داخل ناقل کلونینگPUC57 ، به باکتری اشرشیاکلی منتقل گردید. سپس پلاسمید PUC57-CTB-EX4 استخراج شده از باکتری اشرشیاکلی، با استفاده از آنزیم های محدودکننده Bam HI وSacIبرش داده شد و در ناقل دوتایی بیانی pBI121همسانه سازی گردیدو از طریق آگرواینفیلتراسیون به برگ گیاه تنباکو انتقال یافت. رونویسی ژن اکسندین-4 متصل به زیر واحد Bسم وبا، به روش RT-PCRدر برگ گیاه تنباکو اثبات شد. از برگهای آگرواینفیلتره شده، پروتئین کل استخراج گردید و با استفاده از آنتی بادی ضد زیر واحد Bسم وبا،آزمون الایزا صورت گرفت و تولید پروتئین نوترکیب تایید گردید.
پژوهشگران	شبنم کوکه ای (دانشجو)، بهمن بهرام نژاد (استاد راهنما)