|
عنوان
|
نقش سرین 310 در فعالیت آنزیمی و پروفایل دمایی کاسپاز-9 انسانی
|
|
نوع پژوهش
|
مقاله چاپ‌شده در مجلات علمی
|
|
کلیدواژه‌ها
|
کاسپاز، سنجش آنزیمی، آپوپتوز، جهش زایی
|
|
چکیده
|
زمینه و هدف: کاسپاز-9 یک آنزیم کلیدی در مسیر داخلی آپوپتوز است که فعالیت آن با سازوکارهای مختلفی مانند فسفریلاسیون تنظیم میشود. گزارش شده است که فسفریلاسیون سرین 310 در کاسپاز-9 موشی مانع پردازش آنزیم میشود. نقش این باقیمانده ی آمینواسیدی در فعالیت آنزیمی کاسپاز-9 انسانی نامشخص است. در این پژوهش اثر ایجاد بار منفی روی سرین 310 در فعالیت آنزیمی کاسپاز-9 انسانی مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش ها: با توجه به اینکه فسفریلاسیون منجر به ایجاد بار منفی در کاسپاز-9 میشود، کدون سرین 310 در کاسپاز-9 انسانی به کدون آسپارتات با استفاده از روش جهش زایی هدفمند Quick change جهش داده شد. کاسپاز-9 نوترکیب وحشی و جهش یافته در سویه باکتری BL21(DE3) بیان و با استفاده از کروماتوگرافی گرایشی تخلیص شدند. پروفایل دمایی و فعالیت کاسپاز-9 جهش یافته در مقایسه با آنزیم وحشی به کمک سوبسترای کروموژنیک Ac-LEHD-pNA در شرایط برون تنی سنجش شد. تجزیه و تحلیل آماری داده ها با آزمون t انجام شد. یافته ها: نتایج نشان داد که پارامترهای سینتیکی کاسپاز-9 جهش یافته ی S310D و آنزیم وحشی مشابه هستند؛ اما پروفایل دمایی آن ها متفاوت است. آنزیم جهش یافته ی S310D در دمای 37 درجه ی سانتیگراد فعالیت بیشتر و در دماهای 4، 15، 45 و 60 درجه ی سانتیگراد فعالیت کمتری در مقایسه با آنزیم وحشی داشت. نتیجه گیری: ایجاد بار منفی بر روی سرین 310 در کاسپاز-9 بدون تأثیر بر پارامترهای سینتیکی سبب تغییر در پروفایل دمایی آنزیم میشود.
|
|
پژوهشگران
|
سهیلا محمدی (نفر چهارم)، رضا خدارحمی (نفر سوم)، محدثه محمودیان (نفر دوم)، راحله شاکری (نفر اول)
|