جلال رستم زاده

هدف از این پژوهش ارزیابی اثرات تنش القایی نیتریک اکساید و حفاظت کننده BME در دوره های زمانی مختلف برتوان انجمادپذیری اسپرم جنب بیضه گاو می باشد. برای انجام این پژوهش تعداد 10 عدد بیضه گاو تازه کشتار شده جمع آوری و در مجاورت یخ به آزمایشگاه منتقل شد. پس از جدا نمودن قسمت دم اپیدیدیم و ایجاد چند برش طولی در بافت آن، درون پتری دیش حاوی محیط تیرود لاکتات به مدت 15 دقیقه قرار گرفت. سپس بافت اپیدیدیم از ظروف خارج و محیط های حاوی اسپرم با سرعت 700 دور در دقیقه به مدت 6 دقیقه سانتریفیوژ شد. با برداشتن مایع بالای محلول رسوب کرده، اسپرم اپیدیدیمی به دست می آید. این اسپرم ها از نظر کیفیت و کمیت مورد بررسی قرار گرفتند. سپس اسپرم های جدا شده در دوره های زمانی صفر، 30 و60 دقیقه پس از جمع آوری در داخل رقیق کننده پایه (حاوی 42/2 گرم تریس، 84/1 گرم اسید سیتریک، 5 گرم فروکتوز، 5 درصد زرده تخم مرغ، 5 درصد گلیسرول و 10 میلی گرم استرپتومایسین سولفاته و IU 100000 پنی سیلین) و رقیق کننده حاوی تیمارهای آزمایشی نیتریک اکسید (05/0، 10/0، 15/0 و20/0میکرومول) و BME (5 0/0درصد) قرار گرفته شد و سپس میزان جنبایی، سلامت و دیگر صفات مورد بررسی قرار گرفت. بعد مایع منی رقیق شده از دمای 37 درجه به دمای 5 درجه سانتی گراد رسانده شد (خنک کردن). بعد با گاز نیتروژن تیمارها منجمد شده و در دمای 196- درجه نگهداری شدند. سپس نمونه ها در دمای 37 درجه سانتی گراد یخ گشایی شدند. بعد از یخ گشایی، نمونه ها را رنگ آمیزی و با میکروسکوپ ویژگی های اسپرم شامل زنده مانی، جنبایی، پیشروندگی و سلامت آکروزوم اسپرم مورد ارزیابی قرار گرفتند. سپس برای ارزیابی پراکسیداسیون لیپیدها (اثبات تنش ایجاد شده توسط نیتریک اکسید) تست مالون دی آلدهید بر روی نمونه ها انجام شد، همچنین برای ارزیابی سلامت DNA از SCD (روشی سریع و حساس برای بررسی تخریب DNA) استفاده شد.آنالیز آماری داده ها با استفاده از نرم افزار SAS و در قالب طرح بلوک کامل تصادفی انجام شد. نتایج آزمایش نشان داد که تیمارهای حاوی 5% BME و 1/0 نیتریک اکسید باعث افزایش جنبایی، جنبایی پیش رونده و زنده مانی در زمانهای مختلف دمای تعادل شد. و سلامت آکروزوم و سلامت غشا را نیز در زمانهای صفر، 30 و 60 دقیقه دمای تعادل بهبود بخشیدند. در زمان پس از انجماد و یخگشایی نیز تیمارهای حاوی 5% BME و 1