جلال رستم زاده

هدف از این پژوهش ارزیابی اثرات غلظت های مختلف گزانتین اکسیداز (05/0، 10/0، 15/0 و 20/0 میکرومول) و تره هالوز (5 میلی مول) در رقیق کننده انجمادی در دوره های زمانی مختلف بر صفات مختلف اسپرم منجمد جنب بیضه گاو بود. برای انجام این پژوهش تعداد 10 عدد بیضه از کشتارگاه تهیه شد و در مجاورت یخ به آزمایشگاه منتقل شد. پس از جدا نمودن دم اپیدیدیم و ایجاد چند برش در بافت آن درون محیط تیرود لاکتات به مدت 15 دقیقه قرار گرفت. سپس بافت اپیدیدیم از ظروف خارج و محیط های حاوی اسپرم با دور 700 در دقیقه به مدت 6 دقیقه سانتریفیوژ شد، با برداشتن مایع بالای محلول رسوب کرده، اسپرم اپیدیدیمی به دست می آید. نمونه های اسپرم جمع آوری شده از جنب بیضه پس از ارزیابی اولیه با هم مخلوط و در دوره های زمانی صفر، 30 و60 دقیقه به رقیق کننده انجمادی که حاوی تیمارهای آزمایشی بود، اضافه شد. سپس مایع منی رقیق شده از دمای 37 درجه به دمای 5 درجه سانتی-گراد رسانده شد (3-5/2 ساعت). بعد با گاز نیتروژن تیمارها منجمد شده و در دمای 196- درجه نگهداری شدند. سپس نمونه ها در دمای 37 درجه سانتی گراد یخ گشایی شدند. بعد از یخ گشایی، نمونه ها را رنگ آمیزی و با میکروسکوپ ویژگی های اسپرم شامل زنده-مانی، سلامت غشاء و سلامت آکروزوم ارزیابی شدند و جنبایی، پیش روندگی اسپرم ها با استفاده از روش CASA مورد ارزیابی قرار گرفتند. همچنین برای ارزیابی پراکسیداسیون لیپیدی غشاء آزمایش مالون دی آلدهید و برای ارزیابی سلامت DNA از روش SCD استفاده شد.آنالیز آماری داده ها با استفاده از نرم افزار SAS و در قالب طرح کاملا تصادفی انجام شد. نتایج این پژوهش نشان داد، اثر تیمارهای آزمایشی در دوره های زمانی مختلف (0، 30 و 60 دقیقه) بر ویژگی های اسپرم دارای تفاوت معنی داری می باشد و درصد میانگین پارامترها برای تیمار تره هالوز نسبت به تیمارهای دیگر افزایش یافته است (05/0>P). همچنین تفاوت معنی داری بین غلظت مالون دی آلدهید تیمارهای آزمایشی وجود دارد و بیشترین غلظت برای سطوح 15/0 و 2/0 میکرومول گزانتین اکسیداز می باشد و در زمان سوم غلظت مالون دی آلدهید افزایش یافته است (05/0>P). نتایج آزمایش بررسی سلامت DNA نشان داد، در سه سطح (1/0، 15/0 و 2/0 میکرومول) گزانتین اکسیداز بیشترین فراگمنتاسیون DNA مشاهده شد اما با هم اختلاف معنی داری نداشتند (05/0