یاور وفائی

در این مطالعه امکان تراریختی هسته ای کاهو و تنباکو برای تولید پروتئین ضد ویروس گریفیتسین تحت تاثیر پپتید راهنمای Zera مورد بررسی قرار گرفت. برای این هدف، توالی بهینه شده ژن گریفیتسین متصل شده به توالی KDEL همراه با بدون پپتید راهنمای Zera (دومین انباشت در شبکه آندوپلاسمی از پروتئین γ-zein) مورد استفاده قرار گرفت. الحاق ژن GRFT به درون ژنوم کاهو و تنباکو توسط واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) و سادرن بلات مورد بررسی قرار گرفت. PCR در زمان واقعی بیان بسیار متغیر تراژن در لاین های مورد بررسی را نشان داد که به واسطه الحاق تراژن در نقاط مختلف ژنوم می باشد. پروتئین نوترکیب GRFT به طور موفقیت آمیز در آزمون وسترن بلات و ELISA ردیابی شد. براساس نتایج ELISA، الحاق GRFT با پپتید راهنمای Zera در مقایسه با سازه ژنی بدون پپتید راهنما منجر به انباشت بیشتر پروتئین نوترکیب در هر دو گونه کاهو و تنباکو شد. لاین های کاهو تعداد رونوشت بیشتر از تراژن و درنتیجه میزان بیشتری از پروتئین نوترکیب GRFT (تا 942/8 میکروگرم در 100 میلی گرم بافت برگ) را نسبت به تنباکو نشان داد. هر دو گریفیتسین خالص سازی شده از کاهو (GRFTL) و تنباکو (GRFTT) قابلیت اتصال به gp120 مشابهی را نسبت به گریفیتسین خالص شده از باکتری E. coli نشان دادند. نتایج ما نشان داد که کاهو به عنوان یک محصول برگی، و تنباکو به عنوان یک گیاه مدل در پژوهش های تراریختی، می توانند به عنوان میزبان های مناسب جهت تولید پروتئین نوترکیب GRFT مورد استفاده قرار گیرند، به شرطی که از ترکیب کدونی بهینه شده برای هر گونه و نیز از پپتید راهنمای مناسب استفاده شود.