1403/02/10
محمد حاجی زاده

محمد حاجی زاده

مرتبه علمی: دانشیار
ارکید:
تحصیلات: دکترای تخصصی
اسکاپوس: 57192920449
دانشکده: دانشکده کشاورزی
نشانی:
تلفن:

مشخصات پژوهش

عنوان
: جداسازی ژن پروتئین پوششی با RT-PCRاز گیاهان آلوده به ویروس وای سیب زمینی و بیان آن در باکتری coli Escherichia
نوع پژوهش
پایان نامه
کلیدواژه‌ها
ویروس Y سیب زمینی -پروتئین پوششی- بیان ژن-RT-PCR
سال 1392
پژوهشگران مهین پوراسمعیل(دانشجو)، نعمت سخندان بشیر(استاد راهنما)، محمد حاجی زاده(استاد مشاور)

چکیده

ویروسY سیب زمینی گونه ی تیپ جنس Potyvirus از خانواده Potyviridae می باشد. که از مهم ترین ویروس های سیب زمینی است وگسترش جهانی داشته و سبب کاهش عملکرد وکیفیت محصول سیب زمینی می شود. ذراتPVY میله ای خمش پذیر بوده و ژنوم آن به صورت RNA تک رشته ای سنس مثبت، حدود 9.7 تا 10 کیلو جفت باز است که 10-9 پروتئین را رمزگذاری می کند که یکی از آن ها CP بوده و نزدیک انتهای ´3 قرار دارد در انتهای ´5 ژنوم این ویروس VPg (پروتئین متصل ژنوم ) و در انتهای´3 به صورت پلی آدنینی قرار دارد. این ویروس از طریق تماس شاخ و برگ یا غده در بین گیاهان پراکنده می شود. اگر چه، انتقال با شته مهم ترین راه انتشار طبیعی ویروس محسوب می شود. هدف از این تحقیق، بیان ژن پروتئین پوششی ویروس Y سیب زمینی در باکتریEscherichia coli Rosetta بود تا با تولید آن، امکان تولید آنتی بادی نوترکیب در برابر آن فراهم گردد. برای این منظور بخشی از آر ان ای ویروس موجود در آزمایشگاه با استفاده از آغازگرهای اختصاصی منطبق بر منطقه ژن cpاز روی cDNA سنتز شده با آغازگر تکثیر داده شد. در این تحقیق، قطعات DNA bp801 به پلاسمید pGEM-T متصل و در باکتریDH5α E. coli کلون شدند. سپس، پلاسمید نوترکیب حاوی ژن مورد نظر با روش لیز آلکالینی از باکتری های ترانسفورم شده استخراج و برش آنزیمی با آنزیم های BamHI و SacI برروی این پلاسمید انجام شد. قطعه مورد نظر، به حامل بیان(+) pET21a برش داده شده توسط آنزیم های BamHI و SacI اتصال داده شد. پس از بیان پروتئین پوششی PVY درE.coli وزن مولکولی پروتئین نوترکیب استخراج شده در SDS-PAGE و وسترن بلات بررسی شد. وزن مولکولی مورد انتظار این پروتئین در حدود 35 کیلو دالتون بود. نتایج به دست آمده با دو روش مذکور تایید کننده بیان ژن مورد نظر بودند.