محمد حاجی زاده

ذرات ویروس موزاییک خیار [Cucumber mosaic virus (CMV)]، ایزومتریک با قطر 28 تا 29 نانومتر هستند. یکی از روش های مفید در تشخیص و شناسایی اپی توپ های پروتئین پوششی و مطالعات جهش در مناطق مهم پوشش پروتئین پوششی در مونتاژ ذرات ویروسی بیان ژن پروتئین پوششی در سیستم های پروکاریوتی مانند E.coli و یا یوکاریوتی مانند مخمر می باشد. در تحقیق حاضر ژن پروتئین پوششی ویروس موزاییک خیار که قبلاً در پلاسمید همسانه سازی قرار گرفته بود جدا شد و در پلاسمید بیان مناسب جهت بیان همسانه سازی شد. پس از همسانه سازی به منظور اطمینان از قرار گرفتن صحیح قطعه، تعیین توالی توسط شرکت ماکروژن کره جنوبی انجام شد. پس از اطمینان از درج صحیح ژن پروتئین پوششی در پلاسمید بیان، پلاسمید نوترکیب حاصل به باکتریE.coli سویه-یRosetta ترانسفورم شد. باکتری حاوی پلاسمید نوترکیب رشد داده شد و پس از القا با IPTG بررسی بیان در SDS-PAGE انجام گرفت که نتایج حاکی از بیان ژن پروتئین پوششیCMV بود. سپس به منظور مشاهده ی ذرات تشکیل شده احتمالی استخراج پروتئین بصورت NATURE از باکتری هایی که دارای پلاسمید نوترکیب بودند انجام گرفت. سپس از آزمونهای سرولوژیک DAS-ELISA و دیبا با استفاده از آنتی بادی چند همسانه ای اختصاصیCMV و کانجوگیت ردیابی CMVبرای ردیابی پروتئین پوششی استفاده شد. آنگاه از نمونه مثبت با استفاده از میکروسکوپ الکترونی گذاره JEOL 100-CXIIبا بزرگنمایی 90000 در شتاب ولتاژ kV100 عکسبرداری انجام گرفت. نتایج حاصله حاکیاز بیان ژن پروتئین پوششی و تشکیل ذرات شبه CMV در سیستم پروکاریوتی بود.