1403/02/10
محمد حاجی زاده

محمد حاجی زاده

مرتبه علمی: دانشیار
ارکید:
تحصیلات: دکترای تخصصی
اسکاپوس: 57192920449
دانشکده: دانشکده کشاورزی
نشانی:
تلفن:

مشخصات پژوهش

عنوان
بکارگیری یک روش ساده و سریع برای ترانسفورماسیون Escherichia coli جهت تکثیر ژن پوشش پروتئینی ویروس آبله الو
نوع پژوهش
مقاله ارائه شده کنفرانسی
کلیدواژه‌ها
سلول های مستعد، ویروس آبله آلو، ترانسفورماسیون
سال 1383
پژوهشگران محمد حاجی زاده

چکیده

در این بررسی یک روش سریع و ساده برای تهیه و اماده سازی سلول های مستعد از باکتری E. coli استرین DH5a بکارگرفته شد. برای آماده سازی سلول های مستعد، انتقال دی.ان.ای حاوی ژن پوشش پروتئینی ویروس آبله آلو (PPV) به باکتری E. coli، محلول TSS مورد استفاده قرار گرفت. سول ها با ححجم برابری از این محلول مخلوط و بلافاصله برای انتقال دی.ان.ای آماده شدند. pTOPO حاوی دی.ان.ای خارجی، طی فرایند ترانسفورماسیون به سلول های میزبان منتقل و سلول های ترانسفورم شده در حضور آمپی سیلین، IPTG، X-Gal گزینش شدند. سلول های انتخاب شده در محیط کشت انتخابی رشد داده شدند و با تک کلونی کردن، کلنی های خالص این باکتری تکثیر یافته و برای استخراج پلاسمید مورد استفاده قرار گرفتند. پلاسمیدهای حاوی دی.ان.ای نوترکیب بعد از استخراج، در ژل اگارز الکتروفورز شدند. پلاسمید استخراج شده با آنزیم EcoR1 که محل اثر آن در دو طرف منطقه واردسازی دی.ان.ای خارجی است و همچنین با EcoRV و HindIII که محل اثر آنها بر روی ژن پوشش پروتئینی ویروس شارکا است، برش داده شدند. الکتروفورز پلاسمید استخراج شده، قطعات حاصل از برش با آنزیم و ترانسفورم شدن باکتری با pPPV را تایید کرد. نتایج نشان داد این روش، در تهیه سلول های مستعد و انتقال دی.ان.ای نوترکیب کارایی مطلوبی دارد و تهیه این سلول ها و انتقال پلاسمید به سلول میزبان، در حداقل زمان و بصورت ساده قابل انجام است.