بهمن بهرام نژاد

در این مطالعه، تولید و بیان ژن نوترکیب اکسندین-4 (EX4) متصل به زیر واحد B سم وبا (CTB) در ریشه های مویین کاهو (Lactuca sativa L.) به وسیله ی تراریختی آگروباکتریوم رایزوژنز سویه های ATCC 15834 و 1724 با سازه های استخراجی حاصل از کلون های نوترکیب باکتری E.coli سویه ی TOP10 انجام شد. طی کلونی PCR، تراریختی سویه های باکتری تایید شد و در ادامه نیز پس از تلقیح سویه های تراریخت با ریزنمونه های برگی کاهو، ریشه های مویین حاصل شدند. استخراج های مولکولی در سطح DNA با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن rolB و آغازگرهای اختصاصی ژن CTB-EX4، ریشه مویین بودن و نیز تراریختی نمونه ها را تایید نمود. پس از جداسازی نمونه های تراریخت از غیر تراریخت، از آن ها استخراج RNA صورت گرفت و به کمک کیت سنتز cDNA (شرکت یکتا تجهیز آزما)، بیان نمونه ها با روش RT-PCR، در سه تکرار، با استفاده از آغازگرهای اختصاصی و بر اساس ژن مرجع Actin، توسط نرم افزار GelQuantNET اندازه گیری و مقایسه شد و با نرم افزارهای 9.3 SAS و اکسل 2016، تجزیه و تحلیل داده ها صورت گرفت. همچنین نمونه های شاهد نیز در تمامی مراحل آزمایش همراه با نمونه های تراریخت، قرار داده شد. با در نظر گرفتن نتایج پژوهش، ثابت شد که درج و بیان ژن نوترکیب CTB-EX4 در ژنوم ریشه های مویین تراریخت شده به واسطه ی سویه هایA. rhizogenes امکان پذیر بوده و سویه ی ATCC 15834 از عملکرد و بازدهی بیشتری در تراریختی برخوردار است