راحله شاکری

زمینه و هدف: کاسپاز-9 یک آنزیم کلیدی در مسیر داخلی آپوپتوز است که فعالیت آن با سازوکارهای مختلفی مانند فسفریلاسیون تنظیم می­شود. گزارش شده است که فسفریلاسیون سرین 310 در کاسپاز-9 موشی مانع پردازش آنزیم می­شود. نقش این باقیمانده ­ی آمینواسیدی در فعالیت آنزیمی کاسپاز-9 انسانی نامشخص است. در این پژوهش اثر ایجاد بار منفی روی سرین 310 در فعالیت آنزیمی کاسپاز-9 انسانی مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش ها: با توجه به اینکه فسفریلاسیون منجر به ایجاد بار منفی در کاسپاز-9 می­شود، کدون سرین 310 در کاسپاز-9 انسانی به کدون آسپارتات با استفاده از روش جهش ­زایی هدفمند Quick change جهش داده شد. کاسپاز-9 نوترکیب وحشی و جهش­ یافته در سویه باکتری BL21(DE3) بیان و با استفاده از کروماتوگرافی گرایشی تخلیص شدند. پروفایل دمایی و فعالیت کاسپاز-9 جهش­ یافته در مقایسه با آنزیم وحشی به کمک سوبسترای کروموژنیک Ac-LEHD-pNA در شرایط برون­ تنی سنجش شد. تجزیه و تحلیل آماری داده­ ها با آزمون t انجام شد. یافته ها: نتایج نشان داد که پارامترهای سینتیکی کاسپاز-9 جهش­ یافته ­ی S310D و آنزیم وحشی مشابه هستند؛ اما پروفایل دمایی آن ها متفاوت است. آنزیم جهش ­یافته­ ی S310D در دمای 37 درجه­ ی سانتی­گراد فعالیت بیشتر و در دماهای 4، 15، 45 و 60 درجه­ ی سانتی­گراد فعالیت کمتری در مقایسه با آنزیم وحشی داشت. نتیجه گیری: ایجاد بار منفی بر روی سرین 310 در کاسپاز-9 بدون تأثیر بر پارامترهای سینتیکی سبب تغییر در پروفایل دمایی آنزیم می­شود.